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FluoXpert™ 多重免疫荧光技术
空间蛋白组学被评为Nature Methods 2024年度方法。FluoXpert™ 多重免疫荧光技术（multiplexed immunofluorescence, mIF）基于循环间接免疫荧光染色原理，搭配使用多重免疫荧光试剂套装，可检测多达24个蛋白标记物，这为空间蛋白组学技术的发展提供了强有力的工具。mIF利用不同的宿主物种一抗特异性结合抗原，再通过偶联荧光团的宿主特异性二抗检测每种抗体，通过抗体染色、信号移除和重新染色的迭代过程实现高达24蛋白检测，最终呈现同一个样本单细胞水平、亚细胞分辨率的空间蛋白图谱。mIF的发展有助于深入理解蛋白质在细胞内功能和相互作用，识别功能相关的单细胞状态，促进基础和临床转化的研究。
技术原理
通过染色-拍照-洗脱多轮循环，实现不同种类目标蛋白多重免疫荧光测定。基于抗原抗体特异性结合染色，加上先进的光路系统、图像拼接算法，保证极高的空间分辨率图像的同时，实现组织切片精准定位，描绘出蛋白质空间表达信息。温和洗脱技术保证低组织损伤，并保证新一轮抗原-抗体结合，可实现20+抗体染拍循环。
技术亮点
技术流程
兼容传统切片的制备流程，以石蜡切片为例，组织染色前处理，包括石蜡组织的切片制备、脱蜡、水化，接着进行载片装配、试剂针从试剂盒吸取不同孔位试剂实现不同抗体染色、流体泵流过装有组织切片的芯片载物台实现换液洗脱，通过不同脚本实现多轮染色、拍照、洗脱自动化循环流程。
技术应用
在生物学的各个领域中，许多研究问题只能通过同时观察单个细胞内蛋白质的表达丰度和分布来解决。FluoXpert™ 多重免疫荧光技术（mIF）使得在单个细胞中识别20+蛋白成为可能，有助于认识生物医学中的组织微环境和细胞生态系统。目前mIF已广泛应用于研究目标组织的细胞组成、功能表型、细胞间相互作用，在描绘信号通路研究、肿瘤免疫微环境、预后标志物评价以及伴随诊断开发等方面具有较大的前景。
